反相硅胶键合填料的选型与使用建议:
根据目标分子性质选择
非极性化合物:优先C18填料,利用强疏水作用实现高效保留。
极性化合物:选择短链填料(如C4、C8)或特殊官能团填料(如CN、Diol),或通过调整流动相极性(如增加水相比例)优化分离。
生物大分子:关注填料孔径(需大于分子直径)和pH耐受性,避免强疏水性导致变性。
考虑方法开发需求
高通量筛选:选择机械稳定性高、寿命长的填料(如高纯硅胶基质),减少更换频率。
复杂样品分析:宽pH填料支持**条件下的分离与清洗,延长柱寿命。
梯度洗脱:低比表面积填料可迅速达到平衡,适合梯度洗脱;高比表面积填料提高上样量,适合制备色谱。
操作条件优化
流动相选择:甲醇-水体系粘度较低,适合常规分离;乙腈-水体系洗脱强度更高,可缩短分析时间。
柱温控制:较高柱温(35-50℃)降低柱压并加快传质速率,提高柱效;低温(0-15℃)可能延长保留时间,需根据需求调整。
封尾处理必要性:对碱性化合物或极性小分子,优先选择封尾填料;对极性大分子,可考虑未封尾填料以增强保留。