凝胶过滤柱操作注意事项

　　凝胶过滤柱是一种基于分子大小差异进行分离的层析技术核心工具，也被称为分子筛层析柱或尺寸排阻层析柱(Size Exclusion Chromatography, SEC)。
 

　　凝胶过滤柱操作注意事项：

 

　　层析柱的选择：
 

　　理想的层析柱的直径与长度之比是1:25~100。当用同样直径的层析柱分离两种以上的物质时，长层析柱比短的分辨率高；当用同样长度的层析柱分离两种以上的物质时，层析柱直径大的比小的分辨率高。
 

　　装柱效果：
 

　　装柱效果对凝胶过滤层析影响很大，应该严格按照说明要求，使用装柱装置装柱。确保柱床表面平整，无沟流及气泡，否则应重装。
 

　　洗脱条件：
 

　　洗脱过程中应严格控制流速，切勿过快。上样的体积要小，浓度不宜过高。加样及整个洗脱过程中，严防柱面变干。
 

　　缓冲液的选择：
 

　　纯化过程必须严格控制缓冲液的pH及离子强度。避免使用对凝胶或样品有损害的缓冲液。
 

　　柱子的保养与保存：
 

　　凝胶过滤柱需要注意防止微生物的生长。被微生物污染后的色谱柱将无法重现原来的分离效果与柱效，严重时会使凝胶色谱柱报废。
 

　　常用的保存抑菌剂有0.02%叠氮钠、0.002%洗必泰(hibitane，双氯苯双胍己烷)、0.01%~0.02%三氯丁醇、0.1mol/l氢氧化钠等。
 

　　值得注意的是温度不能过低，以免冻结。为了不冻结可以提高保存时介质的离子强度。