TOSOH凝胶色谱柱操作与维护建议

　　TOSOH凝胶色谱柱操作与维护建议如下：
 

　　一、操作建议
 

　　溶剂与样品准备
 

　　溶剂选择：使用HPLC纯溶剂，必要时过滤去除颗粒物。对于SW系列色谱柱(如G2000SWXL、G3000SWXL)，流动相需与水互溶，如乙腈、甲醇等，避免使用对不锈钢有腐蚀性的溶剂。
 

　　溶剂脱气：通过超声脱气减少气泡干扰，防止柱效降低或形成气室。
 

　　样品溶解：用流动相溶解样品，并过滤(如0.2μm或0.45μm滤膜)去除固体颗粒，避免堵塞色谱柱。
 

　　色谱柱安装与排气
 

　　安装步骤：
 

　　拆卸色谱柱入口密封螺丝，观察是否有溶剂渗出。若有，直接连接管路；若无，表明柱内可能进入空气。
 

　　将色谱柱出口端连接至进样阀，用流动相反方向冲洗(流速0.2mL/min)，直至流出溶剂无气泡。
 

　　确认气体排尽后，按正确方向连接色谱柱。
 

　　排气关键：避免溶剂流速过快或压力骤升，以免降低柱性能。
 

　　运行参数设置
 

　　流速与柱温：根据色谱柱型号(如SW系列建议1.0mL/min)和样品性质设定流速；柱温通常控制在20-60℃，需稳定在设定值。
 

　　检测器参数：根据检测器类型(如UV检测器)设置波长等参数，确保数据准确性。
 

　　进样操作
 

　　手动进样：吸取50-100μL样品溶液，缓慢注入进样口，避免气泡和漏液。
 

　　自动进样：按仪器界面提示设置进样体积、速度等参数，确保重复性。
 

　　分析后清洗
 

　　清洗溶剂选择：
 

　　若流动相为缓冲溶液，先用蒸馏水冲洗柱内盐分，再用合适溶剂(如甲醇)冲洗。
 

　　对于SW系列，可用100%甲醇或异丙醇、四氢呋喃等极性稍弱的溶剂洗脱吸附物质。
 

　　清洗时间与流速：根据污染程度调整，一般为30分钟至数小时，流速0.5-1.0mL/min。
 

　　二、TOSOH凝胶色谱柱维护建议

 

　　日常维护
 

　　压力监测：定期检查柱前后压力，异常时排查原因(如筛板堵塞、填料污染)。
 

　　基线校准：每月检查基线稳定性，若噪声>0.5mAU(UV检测器)或漂移>0.1mAU/min，需清洗检测器流通池或更换氘灯。
 

　　泵密封更换：若发现泵头渗液、压力不稳定或流速误差超过±2%，立即更换密封圈，避免漏液损坏设备。
 

　　长期保存
 

　　短期保存(隔夜或周末)：用不含缓冲盐的流动相保存，或80%左右有机相(如甲醇/水=80/20)防止长菌。
 

　　长期保存：
 

　　反相柱：纯甲醇或乙腈，或80%有机相。
 

　　离子交换柱、水性SEC柱：水溶液(加0.05%NaN₃防霉)。
 

　　正相柱：无论短期或长期，均推荐保存在所用流动相中。
 

　　标签标注：在柱身贴标签，明确保存溶剂和日期，避免误用。
 

　　再生处理
 

　　适用场景：长期使用后柱效下降(如理论塔板数低于初始值80%)。
 

　　再生方法：
 

　　有机物污染：纯甲醇或乙腈以0.5mL/min流速冲洗2-4小时。
 

　　盐沉积或蛋白质污染：阶梯式冲洗(50%乙腈+0.1%TFA冲洗1小时→0.1M NaOH溶液冲洗2小时→纯水平衡至中性)。
 

　　验证再生效果：注射标准样品(如聚乙二醇或蓝葡聚糖)，对比再生前后保留时间与峰形。
 

　　防污染措施
 

　　避免交叉污染：不同样品分析间用强溶剂冲洗色谱柱。
 

　　使用保护柱：在分析柱前加装短保护柱(5-30mm)，拦截杂质，延长主柱寿命。
 

　　防止微生物滋生：水性流动相中加NaN₃(0.05%)或定期更换溶剂。
 

　　物理防护
 

　　避免碰撞与震动：防止柱床变干或填料松动。
 

　　温度控制：室温保存，避免冻结(0℃以下)或高温(>40℃)环境。