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疏水作用色谱概述

更新时间:2016-01-20浏览:2871次

         疏水作用色谱始于1972年SHaltiel及其工作者,他们利用带有碳氢化合物配基的琼脂糖凝胶以“疏水亲和色谱”分离蛋白 质。在其他实验室内也进行了类似研究和探索,1976年Hofstee将这种类型的色谱命名为疏水作用色谱。1980 年前后,不少学者就疏水作用的机理、分离规律等进行了大量研究,但这些工作多是用软或半硬基质进行的,其基本形式是将短烷基链键合于亲水性基球上,作为配 基的烷基链的密度通常不大,且操作压力和流速均不能提高。为改善HIC的分离效率和分离速度,出现了以硬质高聚物微球、硅胶以及CPG为基质的HIC 固定相。

    与其他类型相比,对用于这种填料的硅胶基质并没有特殊的要求,只要孔径在25-100nm之间且有较大的比表面积就可以应用,与对CPG的要求相似。只要经过表面修饰或涂层,使其具有合适的亲水表面和较弱的疏水基,就可以制备出疏水作用色谱。
    尽管曾研究过不同类型的疏水作用固定相,但有实用价值的主要是两类。一类是在基质表面键合上短链烷烃或苯基而成,例如,TOSOH公司的Pheny- TSK -Gel 3000SW、Butyl-TSK 3000 SW柱均是很典型的商品HPHIC柱。另一类是醚型键合相。在硅胶上先键合上环氧丙氧基三乙氧基硅烷,再在路易士酸催化下接上短链烷氧基而成
               
如果将聚乙二醇与环氧化硅胶反应,则可制备出聚乙二醇型HIC 填料。作者的实验室曾以可控孔径玻璃为基质,键合以聚乙二醇,制备出HIC填料。这种填料,系无定型颗粒,粒径分25-37及5-10μm 两种。孔径有30、60 以及100nm等几种。使用了分子量为400、600、800、1000及2000的PEG为配基,研究了不同色谱条件下蛋白质的分离行为。结果表明随 PEG链长的增加,蛋白质的保留加大,比较适宜的是PEG600-1000。对一般生化分离而言,孔径30-60nm较为合适。以结晶胰蛋白酶为样品, 经.:( 分离后的活性回收率为近100%,表明这种.:( 填
料很适合于蛋白质的分离。耿信笃等以硅胶为基质,以改性聚乙二醇为配基,制备了用 于蛋白质分离的HIC 填料。在分离基因重组γ- 干扰素时发现,干扰素的活性回收率有异乎寻常的升高。经研究后认为,这是由于HIC分离过程有利于变性蛋白的复性所致。这更加说明,HIC是生物大分子分 离和纯化的一个重要的手段。

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