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用于纯化甘精胰岛素的GH C8色谱填料

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详细介绍

甘精胰岛素是一种在中性pH液中溶解度低的人胰岛素类似物。在本品酸性pHpH4)注射液中,完全溶解。注入皮下组织后,因酸性溶液被中和而形成的微细沉积物可持续释放少量甘精胰岛素,从而产生得到预期可预见的、有长效作用的、平稳、无峰值的血药浓度/时间特性。

化学名称21AGly-30B a-L-Arg-30Bb-L-Arg-胰岛素
分子式C267H404N72O78S6
分子量:6063
其提纯方法如下:
 
 

发酵液(前体)
上清液
离心去掉细胞
CQK30S
磷酸调pH3.8
乙酸铵洗脱
上样量<50g/L
结晶
酶转化
GH C8反相
 
结晶
甘精胰岛素成品(纯甘精胰岛素;21AGly-30B a-L-Arg-30Bb-L-Arg-胰岛素GH C8色谱填料;绿百草科技
度>99%)
GH C8(120孔径,10um粒径)柱子,10%乙腈-0.25M乙酸平衡,酶转化液1:5水稀释后上样,乙腈梯度洗脱,得到纯度94.5%的产品;上述样品稀释后,再上GH C8(同前),平衡液液为乙腈-0.2M乙酸钠(pH5.0),乙腈梯度洗脱,得到纯度为98.5%产品;上述样品1:3水稀释后,上GH C8(同前),平衡液为乙醇-0.05M乙酸,乙醇梯度洗脱,得到纯度为99%的甘精胰岛素纯品
 
洗脱液加入0.5%的Phenol,4%的ZnCl2,NaOH调节pH为4.08,缓慢搅拌15min,转移到2-8度环境过夜,离心收集沉淀
 
上步得到的样品加入柠檬酸、ZnCl2和调节pH得到结晶沉淀,冷水冲洗该沉淀物

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北京绿百草科技 www.greenherbs.com.cn
 
 
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