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chiral_agp 100.4操作说明

更新时间：2011-07-21浏览：3928次

CHIRAL-AGP 100.4操作说明

1、安装

AGP100.4出货溶剂为15%异丙醇蒸馏水溶液。先用蒸馏水冲洗，开始流速较低，然后慢慢增加到0.5ml/min，并维持2mins，随后流速增加到0.8-0.9ml/min时保持10min，使用流动相平衡色谱柱，推荐流速为0.8-0.9ml/min。

为了保护分析柱不被高亲和力和颗粒杂质污染，推荐使用保护柱，且必须定期更换保护柱，否则将影响分析柱的性能，用于生物分析时尤为重要。

2、保存

色谱柱室温保存。使用时，可以在色谱系统中过夜。但是当缓冲盐中没有有机改性剂，或者有机溶液中含有低浓度乙腈时，必须非常小心，因为在这样的流动相中微生物生长迅速。所以流动相必须现场配制。周末或者短期保存，可将色谱柱置于10%异丙醇的蒸馏水中。长时间的保存，请保存在15%的异丙醇蒸馏水中，使用前，请重复操作上面的安装步骤。

3、流动相组成

使用不同种类的缓冲液能得到的分离效果，比如：磷酸钠或磷酸钾缓冲液，乙酸铵或乙酸钠缓冲液，甲酸甲酯或柠檬酸缓冲液。推荐浓度范围0.01-0.1M，正常：10-20mM。

4、pH

色谱柱pH范围：4-7，pH值长时间的大于7或者小于4，都可能缩短色谱柱寿命，导致二氧化硅分解。

5、有机改性剂

推荐使用下列有机改性剂：1-丙醇，异丙醇，甲醇，乙醇和乙腈，丙醇和异丙醇及乙腈是使用频繁的有机改性剂。无电荷改进剂的类别和浓度对分离因子的影响很大。如：1-丙醇，异丙醇和乙腈在异构体选择性方面有很大的不同，见方法开发部分。使用阳离子和阴离子改性剂也能调整保留时间和异构体选择性。但是，由于对基体的高亲和力，有些改性剂很难全部洗脱，这样，可能影响色谱柱的性能。我们推荐使用无电荷的、阴离子的、阳离子的改性剂。

室温范围20-25℃，但是色谱柱也能在高于或低于该温度下使用，然而当色谱柱使用温度过高时，对所有硅胶基色谱柱，都将缩短色谱柱寿命。

6、样品

当进样针体积为10-20μL时，推荐的样品浓度低于0.10mg/ml，如果可能，将样品溶解在流动相中，如果样品在流动相溶解性不好，加一些高浓度的有机溶剂改性剂，但是有机改性剂的浓度太高，小心引起缓冲盐析出沉淀。避免将样品溶在有机溶剂中。不要注射不干净的样品或者样品中包含有未溶解化合物。在生物分析过程中，使用分离技术过滤样品溶液，定期更换保护柱。

7、清洗色谱柱

如果色谱柱被疏水性原料污染了，将色谱柱反过来（不接检测器），用25%的异丙醇蒸馏水溶液冲洗一个晚上，流速0.2ml/min。

8、方法开发（UV检测器）

样品特征和初的流动相
化合物类型	初流动相
疏水性化合物	10mM醋酸铵或醋酸钠缓冲液，pH4.5
亲水胺，弱酸（苯酚等），非质子类（胺，酯，醇等）	5%的异丙醇10mM磷酸钠缓冲液，pH7.0
强酸（羧酸）	10mM磷酸钠缓冲液，pH7.0
如果化合物包含一些官能团，按照质子官能团确定使用下列哪种方法

疏水性胺：根据初流动相得到的结果，请按下列流程

保留时间和异构体选择性	没有或低异构体选择性，低保留时间	异构体选择性和保留时间都高	高保留时间，无异构体选择性
pH值或无电荷改进剂的优化。	逐渐增加pH值，用异丙醇调整保留时间， ↓ 检测另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇 ↓ 测试低浓度质子改进剂：辛酸1-20mM；己酸或庚酸1-20mM；四乙基胺或四丙基胺1-5mM。	pH降低4，或增加异丙醇。 ↓ 测试另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇	测试不同的无质子改进剂：异丙醇，乙腈，甲醇，丙醇，乙醇。 ↓ 测试低浓度质子改进剂：辛酸1-20mM；己酸或庚酸1-20mM；四乙基胺或四丙基胺1-5mM。

亲水性胺，弱酸，非质子化合物：根据初流动相得到的结果，请按下列流程

保留时间和异构体选择性	没有或低异构体选择性，低保留时间	异构体选择性和保留时间都高	高保留时间，无异构体选择性
pH值或无电荷改进剂或缓冲盐的优化。	降低异丙醇的浓度。 ↓ 测试另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇 ↓ 胺：检测低浓度质子改进剂：辛酸1-20mM；己酸或庚酸1-20mM；四乙基胺或四丙基胺1-5mM。	pH值逐渐减低，增加异丙醇的浓度。 ↓ 测试另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇	见疏水性胺的操作流程

强酸（如羧酸）：根据初流动相得到的结果，请按下列流程

保留时间和异构体选择性	没有或低异构体选择性，低保留时间	异构体选择性和保留时间都高	高保留时间，无异构体选择性
pH值或无电荷改进剂或缓冲盐的优化。	降低pH值，增加缓冲盐浓度到50-75mM（高浓度100mM） ↓ 试试低浓度（1-5mM）质子改进剂DMOA（N，N-二甲基辛胺）	添加异丙醇 ↓ 检测不同的无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇	检测不同的无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇 ↓ 试试低浓度（1-5mM）质子改进剂DMOA（N，N-二甲基辛胺）

AGP方法开发（MS检测器）

样品特征和初的流动相
化合物类型	初流动相
疏水性化合物	10mM醋酸铵缓冲液，pH4.5
亲水胺，弱酸（苯酚等），非质子类（胺，酯，醇等）	5%异丙醇的10mM醋酸铵缓冲液，pH7.0
强酸（羧酸）	10mM醋酸铵缓冲液，pH7.0
如果化合物包含一些官能团，按照质子官能团确定使用下列哪种方法

疏水性胺：根据初流动相得到的结果，请按下列流程

保留时间和异构体选择性	异构体选择性低或没有，保留时间低	异构体选择性和保留时间都高	保留时间高，无异构体选择性
pH值或无电荷改进剂的优化。	逐渐增加pH值，用异丙醇调整保留时间，（浓度越低，选择性越高） ↓ 测试另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇 ↓ 测试低浓度挥发性质子改进剂：TEA（三乙基胺）1-20mM	pH降低4，或增加异丙醇。 ↓ 测试另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇	测试不同的无质子改进剂：异丙醇，乙腈，甲醇，丙醇，乙醇。 ↓ 测试低浓度挥发性质子改进剂：TEA（三乙基胺）1-20mM

亲水性胺，弱酸，非质子化合物：根据初流动相得到的结果，请按下列流程

保留时间和异构体选择性	没有或低异构体选择性，低保留时间	异构体选择性和保留时间都高	高保留时间，无异构体选择性
pH值或无电荷改进剂或缓冲盐的优化。	降低异丙醇的浓度。 ↓ 测试另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇 ↓ 胺：检测低浓度挥发性质子改进剂：TEA（三乙基胺）1-20mM	pH值逐渐减低，增加异丙醇的浓度。 ↓ 测试另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇	见疏水性胺的操作流程

强酸（如羧酸）：根据初流动相得到的结果，请按下列流程

保留时间和异构体选择性	没有或低异构体选择性，低保留时间	异构体选择性和保留时间都高	高保留时间，无异构体选择性
pH值或无电荷改进剂或缓冲盐的优化。	降低pH值，增加缓冲盐浓度到50-75mM（高浓度100mM） ↓ 测试低浓度挥发性质子改进剂	添加异丙醇 ↓ 测试不同的无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇	测试不同的无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇 ↓ 测试低浓度挥发性质子改进剂

9、保护柱的使用

为了保护分析柱不被高亲和力和颗粒杂质污染，推荐使用保护柱，且必须定期更换保护柱，否则将影响分析柱的性能，用于生物分析时尤为重要。

CHIRAL-AGP，CHIRAL-CBH，CHIRAL-HSA，均能提供保护柱

10、选择适当的保护柱

为了优化色谱系统性能，保护柱的内径必须和分析柱的内径相匹配，每种色谱柱的保护柱内径必须和分析柱相匹配，标准的保护柱套CH10.3，适合所有内径的保护柱芯（2，3和4mm）

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