反相c18色谱柱柱效高、分离能力强、保留机理清楚,是液相色谱分离模式中使用最为广泛的一种,对于生物大分子、蛋白质及酶的分离分析,反相液相色谱正受到热烈欢迎。
在日常别离剖析工作中,反相c18色谱柱的正确运用和维护十分重要,色谱柱运用是否妥当,直接影响色谱柱的寿命,稍有不慎就会下降柱效、缩短运用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中,需求留意下列问题,以维护色谱柱。
(1)柱子在装卸、替换时,动作要轻,接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动,避免柱床产生空地。
(2)假如仪器用来做惯例剖析,样品种类有限,但剖析次数多,则不妨为每一类惯例剖析配置一根专用柱,这样有助于延伸柱子的寿命。
(3)避免压力和温度的急剧变化及任何机械轰动。温度的忽然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的忽然升高或下降也会冲动柱内填料,因此在调理流速时应该缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓。
(4)应逐
渐改动溶剂的组成,特别是反相色谱中,不该直接从有机溶剂改动为全部是水,反之亦然。
(5)如运用柱温操控设备时,应留意在通人活动相后才干升温。
(6)一般说来反相c18色谱柱不能反冲,只有生产者指明该柱能够反冲时,才能够反冲除掉留在柱头的杂质。否则反冲会迅速下降柱效。
(7)选择运用适合的活动相,以避免固定相被破坏。有时能够在进样器前面连接一个预柱,剖析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使活动相在进入剖析柱之前预先被硅胶“饱满”,避免剖析柱中的硅胶基质被溶解。
8)避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内,需求对样品进行预处理或者在进样器和反相c18色谱柱之间连接一个维护柱。维护柱一般是填有类似固定相的短柱。维护柱能够并且应该经常替换。