AGP 色谱柱分析瑞格列奈

                                                                   

 

 瑞格列奈拼音名：Ruigelienai    英文Repaglinide：Repaglinide：                                                                    C27H36N2O4      452.59           本品为S（＋）-2-乙氧基-4-{2-[（3-甲基-1（2-（1-哌啶基）苯基）丁基）氨基]-2-氧代乙基）苯甲酸。按干燥品计算，含C27H36N2O4不得少于99.0％。         【性状】本品为白色或类白色结晶性粉末；无臭。           本品在氯仿中易溶，在乙醇或丙酮中略溶，在水中几乎不溶，在0.1mol/L盐酸溶液中微溶。           熔点  本品的熔点（中国药典2000年版二部附录Ⅵ C）为128～132℃。           比旋度  取本品，精密称定，加乙醇溶解并制成每1ml中含10mg的溶液，依法测定（中国药典2000年版二部附录Ⅵ   E），比旋度为＋7.6°～＋9.2°           吸收系数  取本品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml中含20μg的溶液，照分光光度法（中国药典2000年版二部附录Ⅳ A），在243nm波长处测定吸收度，吸收系数（E1% 1cm）为221～235。         【鉴别】（1）取本品约50mg，置干燥试管中，加丙二酸30mg，醋酐0.5ml，置热水浴中加热数分钟，溶液显橙黄色红棕色。           （2）取吸收系数项下的溶液，照分光光度法（中国药典2000年版二部附录Ⅳ A），在243nm与298nm的波长处有大吸收，在229nm的波长处有小吸收。           （3）本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致。         【检查】氯化物  取本品0.5g，加丙酮25ml使溶解，依法检查（中国药典2000年版二部附录Ⅷ  A），与标准氯化钠溶液5.0ml加丙酮25ml制成的对照液比较，不得更浓（0.01％）。           有关物质  取本品适量，加流动相溶解并制成每1ml中约含0.10mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加流动相稀释制成每1ml中含1μg的溶液，作为对照溶液。照液相色谱法（中国药典2000年版二部附录Ⅴ D）试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以醋酸铵缓冲液（取醋酸铵3.85g，加水1000ml，使溶解，用冰醋酸调节pH值4.0）-甲醇（20:80）为流动相，检测波长为243nm，理论板数按瑞格列奈峰计算，应不低于2000。精密量取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高为满量程的20％～30％，精密量取上述两种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录供试品溶液色谱图主成分峰保留时间的3倍，供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，量取各杂质峰面积的总和，不得大于对照溶液主成分峰的峰面积（1.0％）。           左旋异构体  取本品约20mg，置10ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释刻度，摇匀，精密量取适量，加磷酸盐缓冲液制成每1ml中含0.20mg的溶液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液稀释刻度，摇匀，作为对照溶液；另取消旋瑞格列奈对照品适量，加乙醇溶解并稀释制成每1ml中含0.10mg的溶液，作为消旋对照品溶液。照液相色谱法（中国药典2000年版二部附录Ⅴ D）试验，采用手性色谱柱（ChromTech AGP 100×4.0mm5μm），以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾2.72g，加水800ml使溶解，用氢氧化钠试液调节pH值7.0，加水稀释1000ml，即得）为流动相A，乙腈为流动相B，检测波长为240nm。按如下方式进行梯度洗脱。                时  间        流动相A        流动相B               0.0分钟           90％                 10％               5.0分钟           75％                 25％             10.0分钟           75％                 25％           精密量取消旋对照品溶液20μl注入液相色谱仪，各组分出峰的顺序应依次为瑞格列奈和左旋异构体，其分离度应符合要求，理论板数按瑞格列奈峰计算应不低于2000。精密量取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高为满量程的25％，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl分别注入液相色谱仪，记录供试品溶液色谱图主成分峰保留时间的3倍，供试品溶液的色谱图中如显左旋异构体峰，其峰面积不得大于对照溶液主成分峰的峰面积（1.0％）。           二氯甲烷与正己烷  精密称取本品适量，加N，N-二甲基甲酰胺制成每1ml中约含100mg的溶液作为供试品溶液；另取二氯甲烷、正己烷适量，加N，N-二甲基甲酰胺制成含二氯甲烷、正己烷分别为10μg/ml作为对照品溶液；照气相色谱法（中国药典2000年版二部附录Ⅴ E），用5％二苯基-95％二甲基硅氧烷共聚物为固定相的毛细管柱（30m×0.53mm），进样口温度150℃，检测器温度为240℃，柱温为40℃，分流进样。相对标准偏差不得过10％。含二氯甲烷不得过0.06％，含正己烷不得过0.029％。           干燥失重  取本品，以五氧化二磷为干燥剂，在80℃减压干燥恒重，减失重量不得过0.5％（中国药典2000年版二部附录Ⅷ L）。           炽灼残渣  取本品0.50g，依法检查（中国药典2000年版二部附录Ⅷ N），残渣不得过0.1％。           重金属  取炽灼残渣项下的残渣，依法检查（中国药典2000年版二部附录Ⅷ H 第二法），含重金属不得过百万分之二十。         【含量测定】取本品约0.3g，精密测定，加冰醋酸20ml使溶解，加结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定溶液显蓝色，并将滴定结果用空白试验校正，每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/ L）相当于45.26mg的C27H36N2O4。         【类别】降血糖