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凝胶色谱柱厂家

详细介绍

 在单克隆抗体药物的初期研发阶段中,通过对细胞株实施筛选,选出能产生滴度较高、ADCC活性较高的细胞株。此时常会用到的几种评估方法是,通过生物检定法测定ADCC活性;通过表面等离子共振法(SPR)测定人体IgG受体(FcγⅢa等)的亲和力;通过LC/MS分析抗体酶切下来的糖链结构等。但这些方法都需要花费大量的时间和人力。

能够把这些复杂的评估分析法由繁化简,并快速完成分析的HPLC色谱柱就是TSKgel FcR-IIIA-NPR。


使用TSKgel FcR-IIIA-NPR色谱柱可以直接分离抗体,无需对细胞培养液进行前处理。抗体主要可以分离出3个洗脱峰。已有研究表明,抗体糖链末端的半乳糖数量越多,在此色谱柱中的保留能力越强,而保留能力越强的洗脱峰,其ADCC活性就越高。

 

细胞培养液中单克隆抗体的分离

TSKgel FcR-IIIA-NPR色谱柱可以用来测定和监控细胞培养时抗体糖链的性状变化。取不同培养天数的细胞培养液,使用Protein A填料对抗体样品粗纯后,再采用TSKgel FcR-IIIA-NPR色谱柱分析的结果如下图所示。

 

抗体细胞培养天数和产生抗体的变化

随着培养天数的延长,抗体的3个洗脱峰会向前侧的洗脱峰位移。虽然延长了细胞培养天数,抗体的产量增加,但是由于受到细胞外糖链修饰酶的影响,在色谱柱中的保留能力较高的抗体(多糖的末端半乳糖数量较多的抗体)的洗脱峰反而减少了。因此,可以推定产生的抗体的ADCC活性已经降低。

TSKgel FcR-IIIA-NPR的主要分析用途

①确认不同细胞株(CHO细胞、HEK细胞等)中抗体的性状变化。

②确认多个细胞株筛选时抗体的性状变化。

③确认当改变细胞培养基添加剂时抗体的性状变化

④细胞培养过程中随培养天数的变化导致抗体性状变化的确认。

⑤细胞培养规模放大(更改培养方法)时,确认抗体是否发生性状变化。


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