高效筛选抗体ADCC活性色谱柱

TSKgel FcR-IIIA-NPR——高效筛选抗体ADCC活性色谱柱

在单克隆抗体药物的初期研发阶段中，通过对细胞株实施筛选，选出能产生滴度较高、ADCC活性较高的细胞株。此时常会用到的几种评估方法是，通过生物检定法测定ADCC活性；通过表面等离子共振法（SPR）测定人体IgG受体（FcγⅢa等）的亲和力；通过LC/MS分析抗体酶切下来的糖链结构等。但这些方法都需要花费大量的时间和人力。

能够把这些复杂的评估分析法由繁化简，并快速完成分析的HPLC色谱柱就是TSKgel FcR-IIIA-NPR。

使用TSKgel FcR-IIIA-NPR色谱柱可以直接分离抗体，无需对细胞培养液进行前处理。抗体主要可以分离出3个洗脱峰。已有研究表明，抗体糖链末端的半乳糖数量越多，在此色谱柱中的保留能力越强，而保留能力越强的洗脱峰，其ADCC活性就越高。

细胞培养液中单克隆抗体的分离

TSKgel FcR-IIIA-NPR色谱柱可以用来测定和监控细胞培养时抗体糖链的性状变化。取不同培养天数的细胞培养液，使用Protein A填料对抗体样品粗纯后，再采用TSKgel FcR-IIIA-NPR色谱柱分析的结果如图所示。

抗体细胞培养天数和产生抗体的变化

高效筛选抗体ADCC活性色谱柱

随着培养天数的延长，抗体的3个洗脱峰会向前侧的洗脱峰位移。虽然延长了细胞培养天数，抗体的绝对产量增加，但是由于受到细胞外糖链修饰酶的影响，在色谱柱中的保留能力较高的抗体（多糖的末端半乳糖数量较多的抗体）的洗脱峰反而减少了。因此，可以推定产生的抗体的ADCC活性已经降低。

TSKgel FcR-IIIA-NPR的主要分析用途

①确认不同细胞株 (CHO细胞、HEK细胞等) 中抗体的性状变化。

②确认多个细胞株筛选时抗体的性状变化。

③确认当改变细胞培养基添加剂时抗体的性状变化

④细胞培养过程中随培养天数的变化导致抗体性状变化的确认。

⑤细胞培养规模放大 (更改培养方法) 时，确认抗体是否发生性状变化。

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